Expression of putative zinc-finger protein lcn61 gene in lymphocystis disease virus China （LCDV-cn） genome   总被引：1，自引：0，他引：1  

闫秀英  孙修勤 《中国海洋湖沼学报》2009,27(2):337-341

An open reading frame (lcn61) of lymphocystis disease virus China (LCDV-cn), probably responsible for encoding putative zinc-finger proteins was amplified and inserted into pET24a (+) vector. Then it expressed in E. coli BL21 (DE3), and His-tag fusion protein of high yield was obtained. It was found that the fusion protein existed in E. coli mainly as inclusion bodies. The bioinformatics analysis indicates that LCN61 is C2H2 type zinc-finger protein containing four C2H2 zinc-finger motifs. This work provides a theory for functional research of lcn61 gene. Supported by High Technology Research and Development Program of China (863 Program, No. 2006AA100309)  相似文献   

对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒衣壳蛋白基因的克隆表达及抗体制备   总被引：2，自引：0，他引：2  

彭小莉  刘棠  徐维佳  王群力  陈伟玲  陈双雅  王景明  谢明星 《台湾海峡》2008,27(1):37-42

本文根据GenBank登录的对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的全基因组序列(NC-002190),设计出主要结构蛋白基因的相应引物,从厦门发病的对虾中,提取DNA,以此为模板,利用PCR扩增目的基因.再将目的基因分别与pGEX-6p1载体和pET-28a载体连接,构建重组表达载体pGEX-Ⅳ、pET-Ⅳ,重组子经酶切和测序鉴定后导入表达型大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测,大小约为62KDa和41KDa,与预测大小一致.将pET-Ⅳ表达重组蛋白经纯化,免疫小鼠,Western免疫印迹反应结果表明其抗体均可与pGEX-Ⅳ和pET-Ⅳ表达的蛋白发生特异性反应.本研究的结果为对虾IHHNV的快速检测及其免疫提供了研究基础.  相似文献   

牙鲆淋巴囊肿病毒靶器官上病毒结合蛋白的鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

刁菁  战文斌  绳秀珍 《中国海洋大学学报(自然科学版)》2009,39(5)

利用抗牙鲆淋巴囊肿病毒单克隆抗体的间接免疫荧光检测技术,在患淋巴囊肿病牙鲆的表皮、鳃、胃、肠及肾中发现淋巴囊肿病毒的感染,以此确定为病毒感染的主要靶器官。用NP-40细胞裂解液分别抽提靶器官的总蛋白,利用病毒铺覆蛋白印迹技术(VOPBA)对靶器官上淋巴囊肿病毒结合蛋白进行鉴定,结果显示在胃、肠及肾的组织蛋白中均有1个分子量为27.8 kDa的蛋白与淋巴囊肿病毒特异结合,在鳃和表皮的组织蛋白中分别存在分子量为37.6 kDa和56.0 kDa的蛋白与淋巴囊肿病毒特异结合。推测在淋巴囊肿病毒靶器官上的这3种病毒结合蛋白有可能是病毒的受体蛋白。  相似文献   

养殖近江牡蛎致病弧茵的分离与鉴定     

张占会  张其中  李春勇  陈浩如  张吕平 《热带海洋学报》2008,27(6)

从广东省疫区患病近江牡蛎Crassostrea ariakensis消化盲囊及血液中分离纯化出10株细菌，人工注射感染实验发现其中3株细菌注射组死亡率显著高于对照组。3株细菌均为革兰氏阴性，短杆状，能运动。常规生理生化和Biolog细菌鉴定系统测试结果表明，菌株A3G-2与溶藻弧菌Vibrio alginolyticus亲缘关系最近，菌株A2G-5B与解蛋白弧菌V．proteolyticus亲缘关系最近，菌株B1X-1与鲨鱼弧菌V．carchariae亲缘关系最近。为了进一步确定它们的分类学地位，分别测定了3株弧菌的16S rDNA序列，分析相关细菌相应序列的同源性，并构建系统进化树。结果表明，菌株A3G-2与溶藻弧菌亲缘关系最近，菌株A2G-5B与解蛋白弧菌亲缘关系最近，菌株B1X-1与鲨鱼弧菌亲缘关系最近。因此菌株A3G-2、A2G-5B和BIX-1分别被鉴定为溶藻弧菌、解蛋白弧菌和鲨鱼弧菌。组织病理观察发现患病牡蛎主要受损器官是消化盲囊，表现为腺泡管内壁吸收细胞崩解脱落，管腔扩大，进而管壁解体，消化盲囊出现大面积受损。  相似文献   

黄斑篮子鱼去毒相关基因的克隆与肝脏组成型表达分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

王琳  梁旭方  林群  李光照  胡永乐 《热带海洋学报》2009,28(6):79-87

从基因水平探讨海洋鱼类对海洋藻毒素的去毒分子机理。采用RT-PCR法成功克隆了黄斑篮子鱼Siganus oramin肝脏I时相代谢酶细胞色素P450 1A(CYP1A)、II时相代谢酶alpha型谷胱甘肽S-转移酶(GSTA)和rho型谷胱甘肽S-转移酶(GSTR)、热休克蛋白70 (HSP70)、alpha 1型钠钾ATP酶(ATP1A1)及β-肌动蛋白(beta-actin, ACT)基因cDNA核心序列，序列分别长879 bp、582 bp、588 bp、660 bp、749 bp和554 bp。序列同源性分析发现，属鲈形目的黄斑篮子鱼CYP1A、GSTA和GSTR与同属鲈形目的牙鲆Paralichthys olivaceus、欧洲鲽Pleuronectes platessa、真鲷Pagrus major、鲤形目的斑马鱼Brachydanio rerio 相应氨基酸序列同源性较高，CYP1A和GSTA与非洲爪蟾(两栖类)、鸡(鸟类)、小鼠、大鼠和人(哺乳类)相应氨基酸序列同源性低，这可能与鱼类I、II时相去毒酶基因承担水环境毒素去毒代谢的特殊功能有关；而HSP70、ATP1A和β-肌动蛋白在鱼类、两栖类、鸟类、哺乳类中均有较高的同源性，这可能与这些基因在机体中承担的最基本的生命功能相关。应用半定量RT-PCR的方法，以β-肌动蛋白作为外参照，在指数期增长范围内分别得到了CYP1A、GSTA、GSTR、HSP70和ATP1A1 mRNA与β-肌动蛋白mRNA (%)的比值，确定黄斑篮子鱼肝脏去毒相关基因的组成型表达水平。其中，黄斑篮子鱼肝脏CYP1A、GSTA和GSTR基因组成型表达相对较高，HSP70和ATP1A1基因组成型表达相对较低，这可能与不同基因在黄斑篮子鱼海洋藻毒素去毒分子机理中承担的作用相关，为海洋藻毒素在海洋鱼类中的积聚及代谢去毒分子机制的研究提供了相关数据。  相似文献   

有毒赤潮藻及其毒素的危害与检测   总被引：6，自引：0，他引：6  

杜伟  陆斗定 《海洋学研究》2008,26(2):89-97

海洋中可引发赤潮的藻类约有300种,其中有毒赤潮藻为80种左右。现已知道的赤潮藻主要毒素有麻痹性贝毒、腹泻性贝毒、记忆缺失性贝毒、神经性贝毒、西加鱼度和溶血性毒素,前5种毒素的结构已经基本得到证实。有毒赤潮藻的毒素可以在海洋生物体内积累,人类误食含有藻毒素的食品时可能中毒,严重者还可能死亡。海洋有毒赤潮藻及其毒素的检测已经成为当今全球赤潮研究和监测的重要内容之一,可以通过形态学分类方法、分子生物学技术(遗传探针)和免疫学检测技术对有毒赤潮藻进行检测;可以通过生物学、物理化学检测方法和神经受体结合、免疫学检测技术对赤潮藻毒素进行检测。  相似文献   

Effects of salinity fluctuation amplitudes on growth, osmolarity, Na＋-K＋-ATPase activity and Hsp70 of juvenile Chinese shrimp Fenneropenaeus chinensis Osbeck     

丁森  王芳  董双林  高勤峰 《中国海洋湖沼学报》2009,27(4):723-728

The effects of various salinity fluctuation amplitudes (2, 4, 6 and 8) on the growth, osmolarity, Na⁺-K⁺-ATPase activity and Hsp70 of juvenile Fenneropenaeus chinensis cultured in seawater with a salinity of 20 were studied. The results show that weight gain in the salinity fluctuation treatments was better than that in control; in particular, the weight gain of treatments S4 and S0, at 231.8% and 196.3%, respectively, was significantly different (P<0.05). The hemolymph osmolarity of treatments S0, S2, S4, S6 and S8 was 635.4, 630.8, 623.6, 614.4 and 600.3 mOsm/kg, respectively, and decreased with increasing salinity fluctuation amplitude. The level of Na⁺-K⁺-ATPase activity in gills of F. chinensis was higher than that in hepatopancreas, but there were no significant differences among all treatments, either in gills or hepatopancreas (P>0.05). The relative level of Hsp70 in treatment S4 was 48.4% and 40.4% higher than control in muscle and eyestalks, respectively, with the highest values being recorded under a salinity fluctuation amplitude of 4.  相似文献   

海水螺旋藻C-藻蓝蛋白富硒及其抗氧化特性   总被引：1，自引：0，他引：1  

成华  向文洲  吴华莲  彭娟  何慧  肖伟 《热带海洋学报》2008,27(5)

对海水钝顶螺旋藻Spirulina platensis C-藻蓝蛋白的富硒能力及含硒c-藻蓝蛋白对超氧阴离子(O2·)和羟基自由基(·OH)的清除作用进行了研究.结果表明,在添加低浓度硒(40-80mg·L-1)培养时,海水钝顶螺旋藻c.藻蓝蛋白对硒的富集效果显著强于淡水螺旋藻C-藻蓝蛋白.硒浓度为40mg·L-1时,C-藻蓝蛋白对硒的利用率最高,富硒系数最大(O.9%);硒浓度为60mg·L-1时,C-藻蓝蛋白含硒量最高(402mg·kg-1).含硒C-藻蓝蛋白比CJ藻蓝蛋白对超氧阴离子和羟基自由基的清除作用都有所加强,清除效应与C-藻蓝蛋白的含硒量及蛋白浓度呈正相关.C-藻蓝蛋白含硒量最高组(402mg·kg-1)在浓度为180μg·ml-1时,对超氧阴离子和羟基自由基的清除率分别可达到83%和35%,远高于同样条件下其他淡水种类相应蛋白的清除作用.研究结果显示,利用海水培养的螺旋藻能显著提高C-藻蓝蛋白的富硒能力和含硒C-藻蓝蛋白清除超氧阴离子的活性.此研究对开发具有抗氧化功能的含硒C-藻蓝蛋白显示出独特的技术优势和较大的应用潜力.  相似文献   

水杨酸对蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa) 生长及抗逆相关基因的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

丁聪聪  徐年军  张琳  孙雪  李亚鹤 《海洋与湖沼》2015,46(6):1451-1460

以蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)为研究对象, 首先克隆了热激蛋白70(HSP70)和磷 酸甘油酸激酶(PGK)基因全长序列, 然后研究了0-20μg/mL 水杨酸对高温胁迫下HSP70 和PGK 基 因表达, 以及蛋白核小球藻生长、可溶性糖和蛋白含量的影响。结果获得了蛋白核小球藻HSP70 基 因的cDNA 序列2405 bp, 包括60 bp 的5'-非编码区(UTR)、1959 bp 的开放阅读框(ORF)和386 bp 的3'-UTR 和PGK 基因的cDNA 序列1664 bp, 包括35 bp 的5'-UTR, 1398 bp ORF 和231 bp 3'-UTR. 序列比较和分析表明该蛋白核小球藻HSP70 序列与其它绿藻的同源性高达83%-91%, PGK 为 70%-75%.荧光定量PCR 结果显示随着水杨酸浓度的增加, HSP70 和PGK 的表达量在12h 和24h 均有所增加, 而在10 μg/mL 水杨酸浓度下表达量最大, 12h 时分别为对照组的2.57 倍和1.56 倍, 24h 则为1.71 倍和1.79 倍。1-20μg/mL 水杨酸可促进该藻的比生长速率、可溶性糖和蛋白含量的升高。 本文结果表明一定浓度水杨酸对高温胁迫蛋白核小球藻有缓解作用, 且5 和10 μg/mL 水杨酸的效果 最显著。  相似文献   

不同培养方式及换水频率对坛紫菜(Porphyra haitanensis)自由丝状体生长及藻胆蛋白含量的影响     

丁兰平  颜泽伟  张全亮  徐佩杭  黄冰心 《海洋学报》2015,37(6):114-119

本实验以坛紫菜自由丝状体为材料,研究不同培养方式(静置、摇床、通气)和换水频率(5d、7d、10d、20d)对丝状体生长及藻胆蛋白(PE、PC)含量变化的影响。研究结果表明:坛紫菜自由丝状体在摇床培养条件下生长较好,特定生长速率可达10.832 7%~10.891 5%;摇床培养下的丝状体PE含量相对静置培养的较高一些,通气培养的相对较低,最高为36.816 8mg/g;静置条件下培养的丝状体PC含量最高,摇床培养次之,通气培养最低,最低为1.082 4mg/g。相同培养方式下,换水频率对丝状体特定生长速率影响不大;除通气培养外,换水频率20d其PE、PC含量较高。方差分析结果表明:实验范围内的培养方式及换水频率对丝状体特定生长速率大小、PE和PC含量不存在交互作用。本文实验结果对坛紫菜自由丝状体产业化应用于食品加工、色素提取等产业提供了实验理论和依据。  相似文献