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几丁质酶(chitinase)在甲壳动物的蜕皮、消化和免疫等很多生物学过程中发挥重要功能,为深入探讨几丁质酶的免疫防御机制,本实验利用RACE技术克隆了三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)PtCht6基因。该基因cDNA全长2736bp,开放阅读框(ORF)2103bp,编码700个氨基酸,具有几丁质酶GH18家族典型特征。利用实时荧光定量技术分析PtCht6在三疣梭子蟹不同组织、不同蜕皮阶段、不同病原感染以及低盐胁迫(11)下的表达特征,结果显示:PtCht6在各组织中均有表达且在肝胰腺中的表达量最高;在不同蜕皮时期的肝胰腺中,其表达量由蜕皮后期(A/B)、蜕皮间期(C)、蜕皮前期(D)依次递减(P0.05);人工感染WSSV和副溶血弧菌后.PtCht6的表达量在肝胰腺中分别于12h、72h达到最大值,在血细胞中均于12h达到最大值,且相较于对照组,整体显著上调表达(P0.05);低盐胁迫能够显著抑制该基因的表达,最高抑制73倍(P0.05)。同时发现,低盐环境下感染WSSV后,该基因达到峰值的时间明显延迟(至少延迟12h.P0.05)。该研究结果预示PtCht6作为免疫因子参与三疣梭子蟹的病原防御,且低盐胁迫在一定程度上抑制了该基因的免疫功能。 相似文献
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利用甲壳素作为唯一碳源从土壤中筛得的真菌d,与细菌s混合发酵,对其最适产酶条件、所产甲壳素粗酶的制取以及粗酶性质进行初步研究。结果表明,混合发酵产酶的能力与单独发酵相比显著提高,混合发酵最适培养基组分为(×10~(-2) g/mL):尿素1.0,K_2HPO_4 0.07,KH_2PO_4 0.03,MgSO_4 0.05,酵母粉0.5,甲壳素1.0,pH 5.5,接种量2%(体积分数),32℃,130 r/min培养72 h,500 mL锥形瓶培养基装量为100 mL。经过优化,发酵液中甲壳素酶活力从0.73 U/mL提升到1.19 U/mL。通过对粗酶性质初步的研究,发现该酶有较好的稳定性。 相似文献
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有机溶剂及变性剂对南美白对虾体壁几丁质酶的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
从南美白对虾体壁提取几丁质酶,测定了几丁质酶(EC3.2.1.14)催化胶体几丁质水解反应的动力学参数,研究了几种有机溶剂及其变性剂对对虾体壁几丁质酶的影响,以探讨养殖环境与对虾的生长发育过程的相关性。结果是对虾体壁几丁质酶米氏常数Km=2.09mg/mL,最大反应速度Vm=0.93μmol/mL·min;甲醇、乙醇、正丙醇、乙二醇、丙三醇及脲对几丁质酶有抑制作用;二氧六环、二甲亚砜和SDS在低浓度时对酶有激活作用,随着浓度的升高表现出抑制作用;丙酮对酶有激活作用;戊二醛和甲醛对酶的抑制强度不大,最大的抑制程度分别达8.0%和9.8%。表明养殖环境的变化可引起与对虾蜕皮直接相关的几丁质酶生理生化的改变。 相似文献
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生物降解甲壳质的研究 总被引：3，自引：0，他引：3
介绍了利用生物 (主要是微生物 )降解甲壳质的一些研究进展 ,着重讨论了在甲壳质降解中起重要作用的几丁质酶的基本性质和分子生物学特征。指出了生物处理海洋资源 ,开发有用活性物质的应用前景。 相似文献
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几丁质酶是甲壳动物顺利完成生理性蜕壳的关键功能酶．已有研究表明几丁质酶是一个多基因家族．根据甲壳动物几丁质酶保守序列设计引物，应用反转录PCR方法从凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）内脏中扩增得到部分几丁质酶编码基因片段，进一步结合RACE法，克隆得到该几丁质酶完整编码序列．生物信息学分析表明其含有信号肽序列、几丁质酶催化中心序列、PEST连接区和几丁质底物结合部位序列．序列比对发现其与中国对虾（ABB85237．1）、斑节对虾（AF157503．1）和日本对虾几丁质酶（BAA12287．1）具有很高的相似度． 相似文献
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Reliable methods have been developed for the quantitative estimation of chitin, chitosan and chitin deacetylase in sediment samples, as well as two methods for the estimation of chitinase in these samples. The differing substrates used in the latter two methods have produced distinct ‘depth profiles’ for chitinase activity which suggest the presence of more than one chitinolytic system in the sediments of the Ythan estuary. Studies on the mineralization of chitin in these sediments have revealed a complex system with a number of unexpected features. The rate of chitin degradation was reduced in late summer, possibly due to the heavy seaweed growth which covers the mud flats at this time, although the potential degradative activities of the enzymes chitinase and chitin deacetylase were higher in summer than in winter. The proportional rates of degradation of chitin, chitosan and cellulose were similar in both the absence and presence of seaweed overgrowth, although the apparent rates of degradation of these substrates were higher in the absence of seaweeds. Core samples have indicated that the major input of chitin to the sediment ecosystem occurs via deposition at the surface, while the input of chitosan (the deacetylated polymer) occurs via its production within the sediment, primarily within the upper 5 cm of sediment. The concentrations of both these polymers decreased sharply below an ‘interface’ between aerobic and anoxic sediments. 相似文献
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豚鼠气单胞菌CB101在胶体几丁质诱导下产生多种分子量不同的几丁质酶,其中分子量最大的一个几丁质酶Chi1(约91.5kDa)的编码基因已经被克隆.本文报道从CB101发酵液经硫酸铵盐析,DEAE-纤维素柱层析和MonoQ离子交换柱层析,分离纯化出其中的一个分子量约为60KDa的几丁质酶.N端测序的结果表明该酶是Chi1剪缺掉N末端信号肽部分、C末端A区和两个几丁结合区的产物.构建了CB101基因组的cosm id文库,从中筛选到9个产几丁质酶的克隆子,克隆子分析表明它们包含的几丁质酶基因都是chi1.蛋白分离、纯化和基因克隆的实验都暗示CB101的几丁质酶系统只包含一个几丁质酶基因. 相似文献
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海洋弧菌Z010 产生几丁质酶的发酵条件研究 总被引：1，自引：1，他引：0
以海洋弧菌Ｚ０１０ 菌株为对象,研究了其产生几丁质酶的发酵条件。研究表明,其产酶的最佳发酵条件为：２２１６Ｅ液体培养基中含０．５％ （ｗ ／ｖ）的胶体几丁质,０．５％ （ｗ ／ｖ）的蛋白胨,培养起始ｐＨ值为７．０, ２５℃摇床２００ ｒ／ｍ ｉｎ 培养３６ｈ,几丁质酶产出最大。 相似文献