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从微泡菌属AG1（Microbulbifer sp. AG1）克隆得到1302 bp大小的琼胶酶基因，该基因编码产物为一个成熟蛋白（413个氨基酸残基）外加一个信号肽（20个残基）。将不含信号肽片段的琼胶酶在E. coli BL21 （DE3）中进行了异源表达和纯化。使用琼脂糖作为底物，该重组琼胶酶的最适反应温度和pH分别为60℃和7.5。该重组酶表现出优良的热稳定性，在50℃和60℃下处理1 h，重组琼胶酶仍能分别保持67%和19%的残余酶活力。除了SDS，重组琼胶酶对于其他测试的抑制剂、去垢剂和尿素变性剂有着较好的抗性。利用薄层色谱和以对硝基苯-α/β-D-吡喃半乳糖苷为底物的酶活力分析结果表明，该重组琼胶酶为β型琼胶酶，它水解琼脂糖的主要终产物为新琼四糖，而且不同聚合度的酶解产物具有抗氧化活性。 相似文献
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白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是对虾的最主要病毒病原之一,给对虾养殖造成了巨大的经济损失。WSSV分别与三种该病毒膜蛋白VP39,VP124和VP187的特异性抗血清在体外作用后,再注射到螯虾体内,进行中和试验。结果显示,注射同或未同VP124抗血清作用的WSSV,8 d后螯虾的死亡率分别是100%和60%,WSSV的感染能够被抗VP124抗体中和。进一步利用定量PCR分析上述三种特异性抗血清对病毒感染的影响,结果显示,VP124抗血清可抑制WSSV在螯虾体内的增殖。所有结果表明,VP124在病毒的感染中起作用。 相似文献
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对虾白斑综合症病毒基因组同源重复区结合蛋白的筛选 总被引：2，自引：0，他引：2
对对虾白斑综合症病毒（WSSV）基因组序列分析发现，基因组3％的区域均匀分布有与昆虫杆状病毒类似的9个同源重复区，很可能具有昆虫杆状病毒同源重复区参与病毒复制起始或转录调控的功能．以WSSV基因组同源重复区中一个包含高度保守结构域的小重复片断DNA（210bp）作为配体，利用WSSV基因组噬菌体展示库，经过5轮淘选出一个可与DNA特异结合的重组噬菌体克隆，包含的外源DNA片断长度为306bp．通过与WSSV基因组序列对比，发现该序列为WSSV的ORFs中wsv 021的5’端部分．推测wsv 021是一个可能与病毒复制或调控相关的重要功能基因． 相似文献
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利用噬菌体展示技术,发现wssv021是与病毒基因组同源重复区中一个包含高度保守结构域的小重复片断DNA结合的蛋白质的编码基因,可能参与病毒复制或调控.时相转录分析发现,wssv021属于病毒感染的早期基因.将wssv021基因克隆到pQE-30表达载体,在E.coliXL1-Blue中进行融合表达.凝胶阻滞分析显示,体外表达的（His）6-WSSV021蛋白可以和同源重复区中小重复片断DNA特异性相互作用. 相似文献
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This study aimed to improve the thermostability of arylsulfatase from Pseudoalteromonas carrageenovora. A library of P. carrageenovora arylsulfatase mutants was constructed by introducing random mutagenesis using error-prone PCR. After screening, two mutants of H260 L and D84 A/H260 L showed enhanced thermal stability than the wild-type predecessor(WT). Site-directed mutagenesis demonstrated that only amino acid residue at Position 260 plays an important role in the thermostability of P. carrageenovora arylsulfatase. Thermal inactivation analysis showed that the half-life(t_(1/2)) values at 55°C for H260 L, H260 I, H260 Q, H260 F and H260 R were 40.6, 48.4, 30.9, 29.1 and 34.5 min, respectively, while that of WT was 9.1 min. Structure modeling demonstrated that the additional hydrogen bonds and/or optimization of surface charge-charge interactions could be responsible for the increased thermostability imparted by H260 L, H260 I, H260 Q, H260 F and H260 R. 相似文献
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Thermostable SOD is a promising enzyme in biotechnological applications. In the present study, thermophile Geobacillus sp. EPT3 was isolated from a deep-sea hydrothermal field in the East Pacific. A thermostable superoxide dismutase(SOD) from this strain was purified to homogeneity by steps of fractional ammonium sulfate precipitation, DEAE-Sepharose chromatography, and Phenyl-Sepharose chromatography. SOD was purified 13.4 fold to homogeneity with a specific activity of 3 354 U/mg and 11.1% recovery. SOD from Geobacillus sp. EPT3 was of the Mn-SOD type, judged by the insensitivity of the enzyme to both KCN and H2O2. SOD was determined to be a homodimer with monomeric molecular mass of 26.0 k Da. It had high thermostability at 50°C and 60°C. At tested conditions, SOD was relatively stable in the presence of some inhibitors and denaturants, such as β-mercaptoethanol(β-ME), dithiothreitol(DTT), phenylmethylsulfonyl fluoride(PMSF), urea, and guanidine hydrochloride. Geobacillus sp. EPT3 SOD showed striking stability across a wide p H range from 5.0 to 11.0. It could withstand denaturants of extremely acidic and alkaline conditions, which makes it useful in the industrial applications. 相似文献
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为探究华东地区能见度变化情况，利用1973—2020年的能见度数据、2014—2019年的气象要素和污染物浓度数据，采用趋势分析、经验正交函数（Empirical Orthogonal Function，EOF）分解、相关分析的方法，分析了能见度时空变化特征及影响因子。结果表明：①1973—2020年能见度呈显著（p<0.01）下降趋势，变化倾向率为-1.315 km/10a，〖JP〗季节之间存在差异，夏、秋季能见度下降速率较大分别为1.681 km/10a、1.443 km/10a；冬、春季下降幅度相对较小分别为1.092 km/10a、1.091 km/10a。其中，1973—2012年能见度呈显著（p<0.01）下降趋势，变化倾向率为-1.204 km/10a，2013—2020年能见度呈不显著（p>0.05）增加趋势，变化倾向率为2.229 km/10a，近8年（2013—2020年）来能见度存在明显改善。②华东地区南部、北部能见度较好，中部能见度较差。EOF分解第1模态表明华东地区能见度整体变化趋势一致，第2模态具有明显的区域差异。③能见度与相对湿度、PM2.5、PM10、SO2、NO2均呈负相关，与O3质量浓度呈正相关，相对湿度是对能见度下降影响最大的因子，其次是PM2.5质量浓度。气温和气压与能见度的关系存在较强的不确定性。 相似文献
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