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1.
利用同源重组质粒pUTK转化蓝藻Synechococcus sp.PCC7942及胸腺素α1的表达 总被引：5，自引：0，他引：5
采用本实验室构建的丝状蓝藻Calothrixsp.PCC7601基因整合平台系统供体质粒pUTK转化单胞蓝藻Synechococcussp.PCC7942,通过抗性筛选获得了具卡那霉素抗性的转化藻株.经Southem杂交证实pUTK部分序列已整合到Synechococcussp.7942染色体DNA上;红光诱导后通过蛋白质SDS-PAGE电泳,Westernblot证实pUTK的胸腺素α1基因得以有效表达,表达量达到总蛋白的4.8%.结果表明,基因整合平台系统供体质粒pUIK不仅可转化丝状蓝藻Calothrixsp.PCC7601,还可转化单胞蓝藻SynechococcussP.PCC7942. 相似文献
2.
采用本实验室构建的丝状蓝藻Calothrixsp.PCC7601基因整合平台系统供体质粒pUTK转化单胞蓝藻Synechococcussp.PCC7942,通过抗性筛选获得了具卡那霉素抗性的转化藻株。经Southern杂交证实 pUTK部分序列已整合到Synechococcussp.7942染色体DNA上 ;红光诱导后通过蛋白质SDS PAGE电泳 ,Westernblot证实 pUTK的胸腺素α1 基因得以有效表达,表达量达到总蛋白的4.8 %。结果表明,基因整合平台系统供体质粒 pUTK不仅可转化丝状蓝藻Calothrixsp.PCC7601,还可转化单胞蓝藻Synechococcussp.PCC7942。 相似文献
3.
《中国海洋大学学报(自然科学版)》2010,(Z1)
本实验应用降落PCR方法从聚球藻Synechococcus cedrorum中扩增出717bp的hox1基因全序列,并与从Gen-Bank下载13个蓝藻hox1基因序列比较,用MEGA4.0进行序列同源性分析及蛋白结构特性分析。结果表明,Synecho-coccus cedrorum的hox1基因与聚球藻Synechococcus PCC7942和钝顶节旋藻Arthrospira platensis的hox1基因序列同源性分别为99.9%和99.2%,氨基酸序列同源性分别为99.6%和97.9%。还用邻接法和最大简约法构建了系统树并进行了聚类分析。 相似文献
4.
聚球藻是一类分布广泛、数量巨大的微微型浮游植物, 作为蓝藻的代表类群之一, 广泛分布于海洋以及河口区域, 并且具有丰富的色素多样性和遗传多样性。聚球藻根据盐度适应能力可划分为严格海洋型聚球藻和广盐型聚球藻。文章对分离自珠江口的聚球藻K1和南海寡营养海域的聚球藻YX02-1在不同盐度条件下的生长状况进行对比, 并根据ropC1标记基因分析K1和YX02-1的分类地位, 发现K1为广盐型聚球藻, 其在不同盐度下(10‰、13‰、18‰、25‰、33‰)均能生长; 而YX02-1为严格海洋型聚球藻, 在低于13‰的盐度下无法存活, 与其在河口的分布特征相一致。转录组分析显示, 低盐条件下广盐型聚球藻中合成渗透压调节分子的基因(ggpS、SPS、stpA)表达量明显下调, 而膜通道蛋白glzT基因的表达显著上调, 说明广盐型聚球藻耐低盐机制主要是通过减少细胞内渗透压相关小分子合成和增加膜通道蛋白, 提高小分子物质外排来达到细胞内外渗透压平衡。此外, 盐度也会影响广盐型聚球藻的光合作用和代谢水平, 其中参与光合作用的产能基因(ATPF0B、ATPF0A、ATPF1D、ATPF1A)和色素蛋白基因(cpcA、cpcB)表达量在低盐条件下均显著下降, 同时无机氮利用相关基因表达上调。低盐条件下, 渗透压相关小分子的需求减少, 可以使更多的碳源用于支持生长, 同时无机氮的吸收增强, 这两者可能是低盐条件下广盐型聚球藻具有较高生长的原因。 相似文献
5.
整合鲈鱼生长激素基因的蓝藻7942 总被引：2，自引：0，他引：2
利用载体pAMll46与烟草花叶病毒35S启动子，鲈鱼生长激素基因GH连接，构建携带鲈鱼生长激素基因的整合型表达载体pAMGH，用自然转化方法将pAMGH导入蓝藻7942，筛选到6株抗壮观霉素，氨苄青霉素敏感的藻落，提取抗性藻落的基因组总DNA，用生长激素基因特异引物进行PCR检测，结果证实鲈鱼生长激素基因已经整合进入蓝藻7942的染色体中。 相似文献
6.
利用同源重组质粒pUTK转化蓝藻Synechococcus sp.PCC9742及胸腺素α1的表达 总被引：2，自引：0，他引：2
采用本实验室构建的丝状蓝藻Wynechococcus sp.PCC7601基因整合平台系统供体系粒pUTK转化单胸藻Syenchococcus sp.PCC7942，通过抗性筛选了具卡那霉素抗性的转化藻株，经Southern杂交证实pHTKUK部分序列已整合到Synechococcus sp.7942染色体DNA上，红光诱导后通过蛋白质SDS－PAGE电泳，Westem blot证实pUTKpUTK的腺素a1基因得以有效表达，表达量达到总蛋白的4．8％，结果表明，基因整合平台系统供全质粒pHT不仅可转化丝状蓝灌Calothrix sp.PCC7601,还可转化单蓝藻Synechococcus sp.PCC7942. 相似文献
7.
设计了黑鲷ghrelin基因的特异性引物，提取胃组织总RNA并扩增出目的片段，将PCR产物克隆到pGEM—TEasy载体，经质粒PCR扩增、酶切和测序鉴定重组质粒，构建标准曲线等，成功建立了ghrelin基因荧光实时定量PCR检测方法，以准确分析ghrelin基因在黑鲷摄食调节中的作用。运用建立的荧光实时定量PCR方法检测了不同饥饿时段（2天、7天）黑鲷胃、肠、下丘脑组织中ghrelin mRNA的表达变化。结果表明，饥饿2天（短期饥饿），黑鲷胃、肠组织中ghrelin mRNA表达显著上升（P〈0．05），下丘脑ghrelin mRNA表达无显著变化（P〉0．05）；饥饿7天（长期饥饿），黑鲷胃、肠组织ghrelin mRNA表达比饥饿2天显著下降，但仍显著高于对照组，下丘脑ghrelin mRNA表达逐渐升高（P〈0．05）；在同一饥饿时间内不同组织ghrelin mRNA表达存在显著差异（P〈0．05）。黑鲷不同组织ghrelin基因的表达随不同饥饿时段呈现出不同的变化趋势，推测ghrelin基因参与了黑鲷摄食调节的生物学讨程。 相似文献
8.
为了研究不同温度和N、Fe3+质量浓度对微拟球藻脂肪酸组成的影响,采用气相色谱-质谱联用仪,测定了不同处理条件下微拟球藻脂肪酸的组成。并利用荧光定量PCR技术,监测了在不同处理条件下微拟球藻硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)基因的表达差异。结果表明:在缺N的条件下,微拟球藻中的不饱和脂肪酸的比例如C18∶2、C18∶1和C20∶4明显降低;在富N条件下C18∶2、C20∶4和C20∶5等不饱和脂肪酸的比例明显提高;在高温处理下,微拟球藻中C16∶1和C18∶1等单不饱和脂肪酸占总脂肪酸的比例有显著提高,而C20∶4和C20∶5等多不饱和脂肪酸则有明显的降低趋势;在低温处理组中,多不饱和脂肪酸如C18∶2和C20∶4在微拟球藻总脂中的比例明显提高;在富Fe条件下,多不饱和脂肪酸尤其是C20∶4和C20∶5发生积累;在缺Fe条件下,不饱和脂肪酸如C18∶1、C20∶5等占总脂肪酸的比例明显下降。与此同时,在富N、低温、高温和富Fe的条件下,SCD基因的表达量有显著的提高;在缺N和缺Fe的条件下,SCD基因的表达量下降。这揭示了SCD基因在不饱和脂肪酸形成途径中所起的重要作用,同时也证明了基因的表达与产物的合成有着密切的联系。 相似文献
9.
为了解日本囊对虾（Marsupenaeusjaponicus）性腺发育及分化的分子机制,本研究采用改良的引物退火控制技术克隆到了共8个精巢、卵巢的差异表达基因．其中4个为已知基因,分别为凝血酶敏感蛋白基因、皮质棒蛋白基因、增殖细胞核抗原基因和泛素缀合酶基因;4个为未知基因,分别命名为MjACP3-T、MjACP4一T、MjACPl5一T和MjACP4一O基因．采用实时定量PCR方法分析了4个未知基因在性腺发育过程的表达谱,结果表明：MjACP3一T、MjACP4．T和MjACPl5,T基因在日本囊对虾精巢和卵巢中的表达量有显著差异,且在各个时期精巢的表达量均高于卵巢,说明这3个基因可能在精巢的发育中起到某些重要作用．卵巢MjACP4一O基因的表达量变化较大,第5期卵巢的相对表达量达到最高（为1．38）,而其他各个阶段的变化较大,在第4期卵巢的相对表达量最低（为0．03）．在精巢中,MjACP4一O基因的表达量随着精巢逐渐发育成熟呈下降趋势．定量PCR结果与引物退火控制技术的结果有着很好的一致性．研究结果表明,引物退火控制技术是一种简单高效的克隆差异表达基因的技术．采用该技术所克隆到的8个精巢、卵巢的差异表达基因,为进一步了解日本囊对虾性腺发育分化的分子机制提供了基础材料． 相似文献
10.
2017年6月和8月，通过对秦皇岛海域的超微型浮游植物进行现场调查和流式细胞仪分析，发现了聚球藻(Synechococcus)和超微型真核藻类(picoeukaryotes)两大类群，其中聚球藻又分为聚球藻Ⅰ和聚球藻Ⅱ两个亚群。调研期间，正处于秦皇岛海域褐潮高发期。通过分析超微型浮游植物细胞丰度、碳生物量及分布特点，研究了秦皇岛海域在褐潮高发期超微型浮游植物分布及相关环境因子影响。结果表明，6月份超微型真核藻、聚球藻Ⅰ和聚球藻Ⅱ平均丰度分别为1.14×104 个/mL、4.02×104 个/mL和1.04×104 个/mL，碳生物量均值分别为27.22 μg/L、8.49 μg/L和2.27 μg/L；在8月份超微型真核藻、聚球藻Ⅰ和聚球藻Ⅱ平均丰度分别为3.27×103 个/mL、5.79×104 个/mL 和2.58×104个/mL，碳生物量均值分别为6.35 μg/L、13.41 μg/L和5.83 μg/L。超微型真核藻、聚球藻Ⅰ和聚球藻Ⅱ在6月份和8月份表现出不同的分布特征。超微型真核藻的细胞丰度从6月到8月明显降低一个数量级，说明8月份过高的水体温度与低浓度的营养物质等因素限制了超微型真核藻中褐潮种的生长。聚球藻Ⅰ和聚球藻Ⅱ细胞丰度在6月份呈现从河口到近岸逐渐升高的分布趋势，而超微型真核藻呈现下降的分布趋势。与6月份聚球藻Ⅰ和聚球藻Ⅱ细胞丰度分布相反，超微型真核藻和聚球藻Ⅰ细胞丰度则在8月份呈现从河口到近岸逐渐降低的分布趋势，而聚球藻Ⅱ细胞丰度的区域分布趋势不明显，主要分布在水体表层。通过对超微型真核藻、聚球藻Ⅰ和聚球藻Ⅱ与环境因子相关性分析表明，6月份硝酸盐与铵盐是聚球藻Ⅰ细胞生长的主要控制因子，而聚球藻Ⅱ与环境因子没有明显的相关性，超微型真核藻的细胞丰度与硅酸盐浓度呈正相关。在8月份，超微型真核藻细胞的生长受到多种环境因子(硝酸盐、亚硝酸盐、硅酸盐、磷酸盐、温度以及光照)的共同作用的影响，聚球藻Ⅰ细胞丰度与硝酸盐呈正相关，温度与光照则是影响聚球藻Ⅱ细胞分布的关键因素。 相似文献
11.
多倍体诱导会造成物种中不同基因的表达水平变化不同,以内参基因作为对照的相对实时定量PCR是检测基因表达水平变化的一种高效方法,这就需要对多倍体中的内参基因进行筛选以获得较适宜的参比基因。本研究以二倍体和三倍体牙鲆肌肉和脑组织为对象,以绝对定量及2–ΔCt等方法分析管家基因18S rRNA、β-肌动蛋白基因（β-actin）,β-2-微球蛋白基因（b2m）,3-磷酸甘油醛脱氢酶基因（gapdh）,核糖体蛋白L17基因（rpl17）,α-微管蛋白基因（α-tub）,延伸因子-1-α基因（ef1-α）和泛素结合酶基因（ubc-e）的表达水平稳定性。绝对定量分析发现18S rRNA和α-tub的表达在牙鲆二、三倍体肌肉之间有显著性差异,其他基因的表达没有显著性差异,利用2–ΔCt分析方法分析发现只有α-tub的表达在二、三倍体牙鲆肌肉之间有显著性差异,其他基因的表达没有显著性差异;在牙鲆三倍体的脑和二倍体的脑之间,这些基因的表达均没有显著性差异。综合基因表达稳定性和Normfinder分析的结果发现,ef1-α是定量分析牙鲆三倍体的肌肉和二倍体的肌肉之间基因表达差异的较适合的内参基因,α-tub、ubc-e、rpl17、β-actin只在其中一种分析方法中符合要求,而其他基因不符合任何一种分析方法的要求;ef1-α、rpl17是定量分析牙鲆二、三倍体脑组织之间基因表达差异的比较适合的内参基因,β-actin只在基因表达稳定性上符合要求,其他基因不符合任何一种分析方法的要求。本研究为分析牙鲆二倍体和三倍体同一组织之间基因表达的差异奠定了基础。 相似文献
12.
利用SYBR荧光定量PCR技术，制备用于花鲈（Lateolabrax japonicus）PPARα基因实时荧光定量PCR检测的质粒标准品．通过PCR扩增出目的片断344-bp，纯化后连接至pMDI8-T载体，转化宿主菌E．coli DH5α．通过PCR鉴定、双酶切鉴定和测序分析后抽提重组质粒，测定其拷贝浓度，10倍梯度稀释成标准品模板10^8～10^4 copy／mm^3，进行荧光定量PCR分析．结果显示，循环阈值（Ct）与起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系． 相似文献
13.
内源β-微管蛋白启动子经常被用在绿藻外源基因表达载体中，但在条斑紫菜瞬间表达载体中应用内源β-微管蛋白启动子尚未见报道。为检测内源的β-微管蛋白启动子在紫菜瞬间表达中的效率构建了瞬间表达载体和对照载体。质粒pA由pCATR3-enhancer载体的骨架构建而成，瞬间表达载体则是将条斑紫菜β-微管蛋白基因的5’侧翼序列（Tub5’），β-葡萄糖醛酸苷酶（GUS）基因（gusA）和β-微管蛋白的3’侧翼序列（Tub3’）插入载体pA。而对照载体pA—GUSTub3只包含gusA和Tub3’。利用电击法进行条斑紫菜原生质体的瞬间表达。电击后24h开始进行GUS活性定量检测。结果表明在微管蛋白基因侧翼序列的控制下实现了GUS基因的瞬间表达，但是24h后GUS活性降低。同pBI221相比，利用pATubGUS电击后，原生质体表现出更强的GUS活性。结果显示内源微管蛋白启动子是条斑紫菜遗传转化的1种有潜力的调控元件。 相似文献
14.
近年来，北部湾海域连年暴发球形棕囊藻（Phaeocystis globosa）赤潮，对近海生态环境构成了潜在威胁。为了解北部湾海域球形棕囊藻赤潮生消过程及其与其他浮游植物类群的关系，自2016年9月至2017年8月期间，在北部湾海域开展了9个航次的调查，并应用流式细胞仪分析了微型真核藻类、微微型真核藻类、原绿球藻（Prochlorococcus spp.）和聚球藻（Synechococcus spp.）等4类浮游植物类群的变化情况。结果表明，北部湾海域各浮游植物类群主要分布在调查区北部钦州湾外侧海域和雷州半岛西侧近岸海域，其丰度有明显的季节变化。微微型真核藻类在春、秋两季丰度较高，而冬、夏季较低。微型真核藻类、聚球藻和原绿球藻的丰度均呈现夏季高、冬季低的特点，其中聚球藻丰度的季节变化最为显著，与水温变化密切相关。结合对球形棕囊藻赤潮生消过程以及调查海域水文条件的分析可以看出，北部湾海域球形棕囊藻赤潮发生过程中，海水温度下降至20℃左右，并且聚球藻和原绿球藻丰度具有明显变化，有望作为棕囊藻赤潮的预警指标，为该海域棕囊藻赤潮的预测和防控提供依据。 相似文献
15.
《中国海洋大学学报(自然科学版)》2010,(Z1)
为了探讨甲状腺激素受体在大菱鲆(Scophthalmus maximus)体内的表达情况及在细胞水平三碘甲状腺原氨酸(T3)对甲状腺激素受体(TR)表达量的影响,利用荧光定量PCR法检测了大菱鲆8个组织中甲状腺激素受体TRαA、TRβ的表达量,并设计了0,50,75,100和200 nmol/L 5个不同浓度的T3处理大菱鲆肾细胞(SMKC),采用实时荧光定量PCR法测定T3处理后甲状腺激素受体TRαA、TRβ的表达量。结果表明,甲状腺激素受体TRαA、TRβ在大菱鲆不同组织中的表达量各不相同,但两者均在肾脏组织中表达量最高。在不同浓度T3处理后甲状腺激素受体的表达量存在明显的差异,在低浓度条件下,TRαA、TRβmRNA的表达量增加,当T3浓度达到100 nmol/L时,TRαA、TRβmRNA表达量明显降低,说明50,75 nmol/L的T3能够引起细胞中甲状腺激素受体TRαA、TRβ表达量的增加,而100,200 nmol/L的T3会相对抑制细胞中甲状腺激素受体TRαA、TRβ的表达量。 相似文献
16.
紫球藻的研究进展 总被引：10，自引：0，他引：10
紫球藻是多种天然产物的来源，特别是硫酸多糖。本文就近年来紫球藻生理活性物质中的多不饱和脂肪酸（PUFA）、多糖和规模培养的研究进展作一综述。内容涉及二十碳五烯酸（EPA）和花生四烯酸（AA）的分离纯化和测定方法，三酰甘油（TAG）对高不饱和脂肪酸、半乳糖脂合成的贡献。紫球藻多糖具有抗病毒、抑制病毒复制，对单疱疹病毒1型和2型（HSV1，2）及水痘－带状疱疹病毒（VZV）有明显的抗性，它能降低白来亨鸡的血清胆固醇水平和改善蛋黄脂肪酸组成，改变雄性Sprague-Dawley鼠肠形态和降低血清胆固醇水平。紫球藻的规模培养包括采用室外成规模玻璃平板式反应器、气升式反应器、改进型气升式反应器、管式反应器等。 相似文献
17.
《海洋与湖沼》2012,43(4)
采用RT-PCR及RACE技术,从拟穴青蟹眼柄组织中克隆了两种I型高血糖激素CHH基因（分别命名为C1与C2）cDNA全序列。序列分析结果表明：Cl基因全长1859bp,开放阅读框长420bp,编码139个氨基酸,分子量为15．326kDa,等电点为5．540;C2基因全长1739bp,开放阅读框长426bp,编码141个氨基酸,分子量为15．621kDa,等电点为7．618。与其它物种CHH氨基酸序列进行同源性比较分析显示,拟穴青蟹CHH基因与榄绿青蟹CHH基因同源性最高（92％）,依次为日本鲟（80％）、三疣梭子蟹（78％）。聚类分析表明,拟穴青蟹CHH氨基酸序列与榄绿青蟹和日本鲟紧密聚为一支。经荧光定量检测,拟穴青蟹CHH基因在眼柄、肝胰腺、心脏、肠中表达量较高,鳃、胃中表达量很少,肌肉中表达极少。盐度骤变试验结果表明：盐度胁迫24h后,c2的表达量是C1的30倍以上;C2基因盐度5时与对照组的表达量差异不显著（P〉0．05）,盐度15时差异显著（P〈0．05）,盐度22、25、30时差异极显著（P〈0．01）;盐度变化越大,C2的表达量越大。上述结果为进一步深入研究CHH基因的功能及调控机理奠定基础。 相似文献
18.
《中国海洋大学学报(自然科学版)》2015,(10)
微拟球藻(Nannochloropsis oceanica)基因组序列注释的硫脂酶基因(NoTE)长1 314bp,其编码的硫脂酶长437氨基酸,与其他物种硫脂酶序列相似性较低。为验证其功能,将NoTE克隆到原核表达载体pET-30a上并在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了表达。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测到预期大小的蛋白质条带。气相色谱(GC)分析显示,表达NoTE未改变大肠杆菌脂肪酸种类,但改变了其总脂肪酸含量和脂肪酸比例,其C14∶1、C16∶0、C16∶1、C18∶1及总脂肪酸含量较不含重组质粒菌株分别提高了11%、18%、32%、49%和30%。研究结果证明了克隆的硫脂酶基因能在大肠杆菌中表达并具有相应的酶活性。 相似文献
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为了探索生长因子受体结合蛋白2（GRB2）在缢蛏生长发育中的作用，本实验基于缢蛏转录组文库，利用SMART RACE技术克隆缢蛏GRB2（Sc-GRB2）基因的cDNA全长序列，分析其在不同组织和发育时期的表达差异，并在外显子中进行了SNP位点筛选。结果表明，Sc-GRB2基因cDNA全长1 223 bp，开放阅读框711 bp，编码236个氨基酸；氨基酸序列比对发现，缢蛏与文蛤、泥蚶等双壳贝类同源性较高（64%、59%），而与其他物种的同源性为45%~58%，表明GRB2基因比较保守；不同组织的荧光定量PCR （qRT-PCR）结果显示，Sc-GRB2基因在缢蛏7个组织中均有表达，其中足中的表达量极显著地高于其他6个组织（P<0.01）；在8个发育时期的表达差异分析发现，该基因在稚贝期表达量极显著地高于其他7个时期（P<0.01）。SNP位点筛选结果表明，在Sc-GRB2基因的外显子区域共发现11个SNP位点。 相似文献