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将青岛文昌鱼(Branchiostoma belcheri tsingtauense)肌球蛋白重链基因片段亚克隆到pET-30a质粒,构建出重组表达载体并转化入大肠杆菌Escherichia coli BL21中.经SDS-PAGE和Western杂交检测表明,在IPTG诱导下含有重组载体的菌株可表达分子质量约30 ku的融合蛋白.诱导条件优化实验结果显示,该菌株经0.2 mmol/L IPTG诱导1 h就可大量表达此蛋白.可溶性实验确认该重组蛋白是可溶性蛋白.本研究为文昌鱼肌球蛋白重链特异性抗体的制备奠定了基础. 相似文献
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Samee Haider 《中国海洋大学学报(英文版)》2010,9(2):178-184
In order to better understand shrimp allergen,some basic characters of the major allergen of greasy-back shrimp (Metapenaeus ensis)were investigated.The major allergen was extracted and separated,and its peptide mass fingerprint(PMF) was analyzed using matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry(MALDI-TOF-MS).After screening in the NCBI database with Mascot searching engine,the results indicated that the major allergen of greasy-back shirmp was muscle tropomyosin.Database matching search showed that the top protein matched,i.e.the tropomyosin from giant tiger prawn(Penaeus monodon),had a Mowse value of 268.In addition,there were 27 queries matched with the allergen in greasy-back shirmp with an amino acid sequence coverage value of 65%.The matching scores and the sequence coverage values were also high with tropomyosins of other invertebrates,including Tyrophagus putrescentiae and Lepisma saccharina.These results indicated that the allergen of Metapenaeus ensis had high homology with other crustacean allergens,and provided molecular explanations for the high cross-reactivity of the major allergens between crustaceans and some other invertebrates. 相似文献
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本文用免疫细胞化学方法对文昌鱼原肌球蛋白在成熟前后的卵子中的分布及变化进行了观察和研究,并将其在亚微结构上进行了定位。结果表明:在卵巢中的较大的未成熟的卵母细胞上就已有原肌球蛋白的存在,主要分布在内滤泡层及卵内的某些卵黄颗粒上,皮质颗粒上也存有少量;在成熟卵中,原肌球蛋白则大量存在于所有的卵黄颗粒上,皮质颗粒也有少量存在;在量上是由动物极到植物极逐渐递增,这和卵黄颗粒的分布是一致的。 相似文献
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本研究克隆和表达了刺参原肌球蛋白(Tropomyosin,TRP)基因,进一步研究刺参再生过程中重要分子的功能.结果表明,TRP基因序列总长为1203bp,5 ′非翻译区为105bp,3 ′非翻译区为240bp,该序列包含一个855bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),编码284个氨基酸,分子量为33.27kDa,等电点为4.56.利用Escherichia coli对TRP进行了体外重组表达,在1mmol/L IPTG和37℃条件下诱导,能产生分子质量约为38kDa的重组蛋白,Western blot证明重组TRP与鼠抗刺参原肌球蛋白的多克隆抗体能特异性结合. 相似文献
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《广东海洋大学学报》2016,(1)
为揭示高密度CO2(Dense Phase Carbon Dioxide,DPCD)诱导肌球蛋白形成凝胶的机制,利用ANS探针法和荧光法,分别测定在压力5~30 MPa、温度50~70℃、时间10~50 min等不同处理条件下肌球蛋白表面疏水性和酪氨酸内源荧光值,探讨DPCD对凡纳滨对虾肌球蛋白高级结构的影响。研究表明:与未处理的肌球蛋白相比,DPCD处理能使肌球蛋白的表面疏水性和酪氨酸内源荧光值显著增加(P0.05);在相同温度下,DPCD处理的肌球蛋白的表面疏水性和酪氨酸内源荧光值显著高于水浴热处理的(P0.05);DPCD处理压力、温度升高以及时间延长,均能使肌球蛋白的表面疏水性和酪氨酸内源荧光值显著增加(P0.05)。DPCD能够诱导肌球蛋白疏水基团暴露,使紧密的高级结构发生松散。 相似文献
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以南移养殖的刺参为实验材料,采用非均一化的Oliga-dT引物定向克隆技术构建了南移刺参混合组织的cDNA文库。对文库质量的分析结果表明,cDNA文库的库容量为2.2×107cfu,重组率达95.8%,平均插入片段长度750bp左右。挑取cDNA克隆进行5’端测序,成功测序185个反应,分析得到136个单基因簇(Unigene),其中包括40个重叠群(Contigs)、96个单拷贝EST(Singletons)。结果表明,克隆南移养殖的刺参原肌球蛋白(tropomyosin,Trp)cDNA全长序列为1112bp,ORF编码284个氨基酸,其预测蛋白的分子量为33.27kDa,等电点为4.56。该氨基酸序列与紫石海胆、南极大磷虾、锯缘青蟹、文昌鱼、河蟹、家蚕同源性分别为62%、51%、46%、49%、47%、46%。 相似文献
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