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为获得古罗糖醛酸(Guluronate)含量高的细菌胞外褐藻多糖,利用PCR从海洋细菌Pseudomonassp.QDA中克隆了其甘露糖醛酸C-5差向异构酶基因(algG),连接入质粒pMF 54Km,构建了重组表达载体pMF54 Km-algG。利用三亲接合法将pMF54 Km-algG转入菌株QDA中,获得algG过量表达重组菌株QDA-G1。H-NMR测定结果表明,QDA-G所产的褐藻多糖中β-D-甘露糖醛酸(M)与它的C-5差向异构体α-L-古罗糖醛酸(G)的比值为0.38,G的质量分数达到74.2%,比野生菌株QDA提高了26.4%。且重组菌株遗传稳定性良好,连续传代20代后,M/G的比值无明显变化。 相似文献
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以双功能褐藻胶裂解酶 (Pseudoalteromonas sp.strain No. 2 72 )分别降解均聚古罗糖醛酸(PG)和均聚甘露糖醛酸 (PM) ,经 Bio- Gel- P6和 POROS- HQ2 0分离得到 2种三糖纯品 ,经 ESI- MS,1 H- NMR,1 3 C- NMR,1 H- 1 H COSY,1 H- 1 3 C HMQC确定其结构为 Δ4,5-古罗糖醛酸 - α(1→ 4 ) - L-古罗糖醛酸 -α(1→ 4 ) - L -古罗糖醛酸 (简写为Δ GG)和Δ4,5-甘露糖醛酸 -β (1→ 4 ) - D-甘露糖醛酸 -β (1→ 4 ) - D-甘露糖醛酸 (ΔMM) ,为进一步从事构效关系研究提供结构信息。 相似文献
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用两种酸局部降解法,制备了三种底物:短链多聚甘露糖醛酸(SM)、短链多聚古罗糖醛酸(SG)和短链多聚甘露糖醛酸-古罗糖醛酸(SMG)。用粘度下降法,证明酶Ⅰ为外切酶,酶Ⅱ和酶Ⅲ为内切酶。用Somogyi-Nelson法,测定酶解底物产生的还原性,表明三种酶对褐藻酸、SM和SMG的作用很强,而对SG的作用很弱。用紫外吸收法,测定酶解各种底物后,生成产物的吸收光谱,证明三种酶裂解SM和SMG后,产物在230nm处有强吸收峰;而三种酶裂解SG后,产物在230nm附近无明显峰值。以上证明,三种酶都是多聚甘露糖醛酸裂合酶(EC4·2·99·4)。三种酶裂解褐藻酸后,都能使M/G比值下降,其中酶Ⅰ降得最大,为3.65倍。因此,有可能用酶法制备阻吸90Sr的药物。 相似文献
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Vibrio sp.510产褐藻胶裂合酶的底物专一性分析 总被引：4，自引：0，他引：4
Vibrio sp.51 0具有很强的产生褐藻胶裂合酶的能力。本实验对该菌发酵产生的褐藻胶裂合酶经疏水色谱除去杂蛋白 ,再经灌注色谱分离得到 3个酶组分峰。经底物专一性检测 ,峰 1和峰 3对聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸均具降解作用 ,峰 2只对聚甘露糖醛酸有降解作用。园二色谱测定酶的二级结构 :峰 1结构最为复杂 ,以β-转角为最高 ,占 31 .5% ,无规线团占 2 7% ,α-螺旋占 2 5.8% ;峰2为β-折叠 ,占 95.5% ;峰 3以 60 %的α-螺旋和 40 %的无规线团形式存在。 3个分离峰的底物专一性和二级结构的差异证明了褐藻胶裂合酶蛋白的结构与功能之间的相关性。 相似文献
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一种新的褐藻胶寡糖制备方法—氧化降解法 总被引：8，自引：0，他引：8
建立了一种新的褐藻胶寡糖的制备方法,即氧化降解法。通过褐藻胶来源的聚甘露糖醛酸(PM)在不同浓度的过氧化氢、不同温度和不同反应时间下降解优选降解条件。以包含3～11糖单体的寡糖混合物为目标产物,以相应的降解产物的平均分子质量为1500u为选择标准,获得氧化降解法的最佳条件：过氧化氢浓度5％,反应温度90℃,降解时间2h。以该条件降解PM获得的降解产物经圆二色谱、紫外光谱及红外光谱测定表明,制备的寡糖保持了甘露糖醛酸的结构特点。提示该方法可用于褐藻胶寡糖的制备。 相似文献
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多糖是一种生命的基础物质 ,其功能和作用日益受到重视 ,糖生物学与糖工程的研究必将成为基因工程、蛋白质工程及糖链结构分析技术之后新的研究热点。探讨多糖的研究方法、解决糖链的测序问题成为该研究领域的关键。褐藻胶是一种重要的海藻工业产品 ,是由古罗糖醛酸 (G)和甘露糖醛酸 (M)组成的一种典型的多糖类 ,广泛应用于工业、农业、医药、食品等各个领域。研究发现 ,不同的褐藻酸酶可以作用于褐藻酸的不同位点 ,形成不同的糖片段或寡糖 ,经过分离、纯化 ,应用电泳、色谱、质谱、核磁共振等方法可以确定糖链的结构、组成及取代基的位置… 相似文献
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几种海藻多糖硫酸酯碱式铝盐的制备 总被引：1，自引：0，他引：1
本文以褐藻胶和κ-卡拉胶为原料通过酸水解分别获得了低聚的甘露糖醛酸、古罗糖醛酸和低聚 κ-卡拉胶 ,并采用 HPGPC法测定了这 3种低聚糖的重均分子量。在此基础上再经硫酸酯化和成盐修饰制备了各自的硫酸酯碱式铝盐。对制得的几种碱式铝盐进行了红外光谱 (IR)分析和有机硫含量 (S% )、铝含量 (Al% )及样品制酸力等部分理化性质的测定。测定结果初步显示出这几种海藻多糖硫酸酯碱式铝盐较好的抗消化性溃疡前景。 相似文献
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褐藻胶是一种多糖,为线性长链聚合物,呈大分子网状结构体,其基本单元是甘露糖醛酸共聚块(M-块)和古罗糖醛酸共聚块(G-块)及M者交替共聚块(MG-块),褐藻多糖是细胞壁的重要组成部分,并具有良好的胶体化学性能,如悬浮、乳化、增稠、絮凝等特性,被广泛应用于食品、医药等行业.本文应用汞膜电极反向极谱法以Ph+2等离子为例,研究和探讨了植物生长所必需的微量元素对褐藻胶结构的穿透性,为试制以褐藻多糖为一定组分的新型植物生长化控营养素提供理论参考. 相似文献
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一株产褐藻酸多糖的海洋假单胞细菌Pseudomonas sp.QDA的筛选和鉴定 总被引：9，自引：0，他引：9
根据已获褐藻酸多糖生物合成基因簇中褐藻胶裂解酶基因(αlgL)的序列设计特异性引物，利用PCR技术从海洋微生物中筛选到1株能够分泌胞外多糖的细菌。采用形态学观察和16S rDNA序列分析鉴定该菌株，结果为假单胞属细菌，命名为Pseudomonas sp.QDA；系统发育树显示该菌株与P.putida亲缘关系最近。菌株产生的胞外多糖可被褐藻胶裂解酶(AlgL)降解，并在紫外234nm处检测到特征性吸收，初步证明含有褐藻酸多糖。 相似文献
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褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum)是一种海藻酸降解菌.本实验采用PCR的方法,以褐球固氮菌基因组DNA为模板,克隆出约1.05 kb的海藻酸裂解酶基因algL的成熟蛋白编码序列,并将其插入巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC9K中,获得重组质粒pPIC9K-algL.重组质粒线性化后用聚乙二醇(PEG)法导入毕赤酵母菌株GS115中,获得高效分泌表达海藻酸裂解酶的毕赤酵母工程菌株.用甲醇诱导培养基进行摇瓶发酵,表达得到43 kDa的目的蛋白,酶活力可达1 400 U/cm3左右.经测定,该重组酶的最适反应pH为8.5,最适反应温度为40℃,并且在20~55℃,pH2.0~11.0具有较好的稳定性.另外,10 mmol/cm3的Cu2+,Fe2+,Co2+,Mn2+和Ca2+对酶有不同程度的抑制作用. 相似文献
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褐藻酸钠降解工艺的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
初步研究褐藻酸钠在盐酸乙醇溶液中的部分降解过程。实验研究水浴温度，乙醇浓度，盐酸浓度和降解时间对褐藻酸钠降解的影响。指出：在其它条件相同的情况下，水浴温度、盐酸浓度和水解时间呈正相关，乙醇具有促进盐酸降解褐藻酸钠的作用，并表明乙醇浓度与降解速度呈负相关，指出适宜的乙醇用量为５％～１０％，同时还得到了制备不同粘度褐藻酸钠的适宜条件。 相似文献
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海洋脂肪酶ADM47601固定化方法的研究 总被引：1，自引：1，他引：0
采用海藻酸钠、壳聚糖、聚乙烯醇和明胶等材料, 进行对脂肪酶ADM47601的固定化研究。结果表明, 使用壳聚糖固定化脂肪酶, 在最优条件为2% (W/V)壳聚糖, 10% NaOH, 1%乙酸, 0.25%戊二醛, 每克载体添加840U脂肪酶时, 最大固定化酶活力回收率为87.06%。使用海藻酸钠-明胶固定化脂肪, 在最优固定化条件下, 最大固定化酶活力回收率为54.45%。使用聚乙烯醇固定化脂肪酶, 在最优固定化条件下, 最大固定化酶活力回收率为33.22%。使用海藻酸钠固定化脂肪酶, 在最优固定化条件下, 最大固定化酶活力回收率为17.11%。对比四种不同固定化酶方法, 脂肪酶活力回收率高度高低顺序为: 壳聚糖吸附交联法>海藻酸钠明胶协同包埋法>聚乙烯醇-硼酸法>海藻酸钠包埋法。 相似文献
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乙酰褐藻酸丙二酯的制备与表征 总被引：1，自引：0，他引：1
为了改变褐藻酸丙二酯的溶解性,本文以氢碘酸为催化剂,将褐藻酸丙二酯与乙酐反应,制备了乙酰褐藻酸丙二酯。生成物不溶于水,可溶于多种中等极性的有机溶剂。本文用IR,~1H-NMR,HGPC对其进行了表征,并对反应条件对产率的影响进行了探讨。 相似文献
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采用海藻酸钠絮凝剂法、双缩脲法、重铬酸钾回流氧化等方法,研究了回收带鱼鱼糜漂洗液中蛋白质的最佳条件,以期为鱼糜漂洗液蛋白质的利用提供参考。结果表明,海藻酸钠回收带鱼鱼糜漂洗液蛋白质的最佳条件为:海藻酸钠添加量为1.11mg/ml,鱼糜漂洗液蛋白浓度16.54mg/ml,pH4.6,温度4℃,处理时间20min;在此条件下蛋白质回收率达86.68%,COD去除率达58.67%。实验表明海藻酸钠对鱼糜漂洗液蛋白质去除效果非常显著。 相似文献
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Pseudomonas sp．QDA是从海水中发现的产生褐藻多糖的细菌，无致病性。为提高QDA菌株褐藻多糖的产量。本文利用PCR克隆了粘性菌株P．aeguginosa FRD1的atgT基因，连接入质粒pMF36-Kan，构建了重组表达载体pMF36-Kan-algT。利用三亲接合法将pMF36-Kan-algT转入菌株QDA中。糖醛酸含量测定结果表明，atgT基因过量表达菌株的褐藻多糖产量比出发菌株QDA平均提高了3．3倍，其中菌株A25提高了4．5倍。通过培养条件的进一步优化，A25菌株的褐藻多糖产量与菌株QDA相比提高到8．18倍。 相似文献