翡翠贻贝CYP4基因克隆及其表达水平分析   总被引：1，自引：0，他引：1       下载免费PDF全文

周驰  李纯厚  张为民  贾晓平 《热带海洋学报》2010,29(4)

利用简并引物PCR以及cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术获得了总长度为1197bp的翡翠贻贝Perna viridis CYP4基因cDNA序列.根据所获得的翡翠贻贝cDNA序列设计定量PCR引物,利用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR)技术测定了CYP4基因在野生翡翠贻贝消化腺、足和性腺中的表达水平.此外,本研究还应用实时荧光定量PCR技术对经过Aroclor1254暴露处理对翡翠贻贝性腺中CYP4表达水平的影响进行了定量测定.研究结果表明,CYP4基因在野生翡翠贻贝消化腺、足和性腺中均有表达,且其表达水平具有组织差异和性别差异;Aroclor1254暴露处理对翡翠贻贝性腺CYP4基因的表达水平有明显的诱导作用,并且这种诱导作用有明显的时间和剂量效应.本研究为CYP4基因作为生物大分子标记物在环境监测领域的应用提供了分子生物学水平的支持.  相似文献   

珊瑚哀歌     

方舟 《海洋世界》2012,(8):58-59

珊瑚一直是海洋生态系统的重要组成部分。大西洋加勒比海和印度洋一太平洋的广泛海域内，都生长着大量的珊瑚。珊瑚具有维护海洋生物多样性、保护陆地海岸线等重要作用，然而在近几十年，由于气候变暖、病毒和海洋污染等因素的影响，珊瑚的生存正受到严重的威胁。最近，科学家们已经发现了两种病毒能够感染单细胞微藻，而这些单细胞微藻生活的环境恰恰是珊瑚生存的环境。珊瑚与这些藻类是以共生的形式存在的，病毒对单细胞微藻的感染，可能会“传染”给珊瑚，让珊瑚“得病”，进而引起珊瑚礁的白化，使珊瑚大面积死亡。其实，藻类与珊瑚感染病毒，也不是新鲜事儿。珊瑚、藻类和病毒已经在海洋中进化了数百万年。在这漫长的岁月中，它们都经受住了自然的考验，病毒虽然一直对珊瑚和藻类产生着影响，但三方一直处于一种微妙的平衡中，都没有遭受灭绝的厄运。目前，人类已经知道20多种病毒会影响珊瑚的生长，但一直不知道导致这些病毒影响珊瑚的根源是什么。  相似文献   

羊鲍(Haliotis ovina)和耳鲍(H.asinina)MtDNA COⅠ和COⅡ基因片段序列的比较研究          下载免费PDF全文

黎中宝 《海洋与湖沼》2008,39(2):168-173

采用基因测序的方法,对我国海南产的羊鲍和耳鲍两个自然种群的COⅠ和COⅡ基因片段进行了PCR扩增和测序。结果表明,羊鲍和耳鲍COⅠ基因片段的核苷酸序列均为193bp,4种碱基组成非常相似,且其A T的含量也非常相似,分别为45.08%和45.60%。羊鲍和耳鲍COⅠ基因片段的核苷酸序列之间有29bp的差异,其中有8处发生碱基颠换,21处发生碱基转换,差异为15.03%,同源性为84.97%;羊鲍和耳鲍COⅡ基因片段的核苷酸序列均为157bp,羊鲍和耳鲍4种碱基组成差异较大,且其A T的含量也不同,分别为59.24%和55.41%。羊鲍和耳鲍COⅡ基因片段的核苷酸序列之间有19bp的差异,其中3处发生碱基颠换,16处发生碱基转换,达到12.10%的差异,同源性为87.90%。分子变异分析表明羊鲍和耳鲍物种间的变异组成为0.50,变异百分数为100.00,羊鲍和耳鲍物种间的遗传分化显著(FST=1,P<0.001)。  相似文献   

对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(福建株)基因组的克隆   总被引：2，自引：0，他引：2  

吴昊  徐丽美  杨丰 《台湾海峡》2008,27(2):147-151

对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)是世界各地养殖和野生对虾的重要病原之一.目前,GenBank已收录了分离自夏威夷、加利福尼亚、泰国、中国台湾等地的IHHNV全长或部分基因组序列.虽然中国大陆在养殖对虾中也普遍检测到了IHHNV,但未见其基因组序列报道.本文首先利用DNA末端加尾和嵌套PCR克隆了IHHNV基因组两末端序列,并根据测定的末端序列设计引物,PCR扩增出中国福建株IHHNV基因组序列.  相似文献   

利用实时荧光定量PCR法测算红螯螯虾实体组织的细胞数量          下载免费PDF全文

郑在超  李钫  杨丰 《应用海洋学学报》2021,40(2):342-348

螯虾是重要的水产养殖动物,也是研究甲壳动物疾病与免疫的一个良好模型。在研究不同组织的功能及受病原感染的影响时,需要了解组织内的细胞数量。但是,目前常用的细胞计数方法仅适用于单细胞悬液,无法用于实体组织。本研究以红螯螯虾(Cherax quadricarinatus)为对象,建立了基于基因拷贝数定量分析的实体组织细胞数量测算方法。首先克隆了beta-actin基因和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)基因(GAPDH)的部分DNA序列。在其内含子和外显子区域分别设计引物,使之只能以基因组DNA为模板进行扩增。其次,通过对实时荧光定量PCR (qPCR)熔解曲线的评估,确定以beta-actin作为目标基因。以血细胞基因组DNA为标准模板,进行beta-actin基因的qPCR分析。结果表明,在1×10～1×10~5个细胞的范围内,Ct值与细胞数量的对数之间呈良好的线性关系。线性回归得到回归曲线和回归方程Ct=38.30-3.37lg (N),N为细胞数量。最后,取红螯螯虾的鳃和肝胰腺组织为待测样,进行beta-actin基因qPCR分析,得到Ct值;根据上述方程计算得鳃组织细胞含量为1.8×10~5～2.2×10~5个细胞/mg组织,而肝胰腺组织细胞含量为5.5×10~5～6.0×10~5个细胞/mg组织。这一基于基因拷贝数和qPCR的细胞定量方法,具有简单便捷和高通量的优点,可用于测算螯虾实体组织的细胞数量。  相似文献   

低温胁迫对军曹鱼幼鱼脂代谢相关基因表达的影响     

蔡润佳  张静  黄建盛  施钢  潘传豪  谢瑞涛  陈刚  张健东  王忠良  汤保贵 《海洋学报》2021,43(11):116-122

将两组军曹鱼(Rachycentron canadum)幼鱼分别在常温(30.5±1.0)℃和低温(20.0±0.5)℃环境下饲养7 d,并于第1天、第4天、第7天3个时间点采集肝脏、肌肉和腹腔脂肪,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析5个脂代谢相关基因的表达变化情况,以探究低温胁迫对军曹鱼脂质合成与分解代谢的影响。结果显示,第1天时,肝脏的肉碱脂酰基转移酶-1基因(cpt-1)、脂肪激素敏感脂肪酶基因(hsl)以及肌肉的cpt-1、hsl、单酰基甘油酯酶基因(mgl)等显著上调(p<0.05),肝脏、肌肉的乙酰辅酶A羧化酶基因(acc)和脂肪酸合成酶基因(fas)以及腹腔脂肪(IPF)5个脂代谢相关基因表达均显著下调(p<0.05);第4天时,肝脏的cpt-1、hsl、mgl和肌肉的hsl、mgl、acc、fas以及IPF的cpt-1、hsl、mgl、acc等表达上调(p<0.05),肝脏的acc、fas表达显著下调(p<0.05);第7天时,肝脏和IPF的cpt-1、hsl、mgl、acc和肌肉的hsl、mgl、acc等表达上调(p<0.05),肌肉cpt-1和肝脏fas表达显著下调(p<0.05)。结果表明,军曹鱼幼鱼在低温胁迫前期通过抑制脂合成代谢,促进肝脏和肌肉中的脂质水解,通过抑制腹腔脂肪的脂质分解来响应低温胁迫;在低温胁迫后期,军曹鱼幼鱼脂合成和分解代谢均显著提高,且利用脂肪酸提供能量的主要组织由前期的肝脏和肌肉转变为肝脏和腹腔脂肪。  相似文献   

泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)病原霍乱弧菌(Vibrio cholerae)PCR 与LAMP检测方法的比较研究          下载免费PDF全文

张晓君  白雪松  毕可然  许加涛  秦蕾  阎斌伦 《海洋与湖沼》2013,44(1):209-214

采用分子生物学方法,以霍乱弧菌lolB为靶基因设计特异性引物,进行了霍乱弧菌的PCR和环介导等温核酸扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测技术研究,并对它们的特异性、灵敏性和实际应用进行了比较.结果表明,所建立的PCR检测霍乱弧菌的方法最低检测限为4.0× 103 CFU/ml; LAMP检测方法在65℃下恒温扩增60min,检测限为4.0×101 CFU/ml,反应产物加入荧光染料SYBR Green Ⅰ后反应液呈现明显的绿色;以温和气单胞菌、副溶血弧菌、鳗弧菌及美人鱼弧菌为对照菌株,检测结果均为阴性;霍乱弧菌人工染菌的8种水产品进行PCR及LAMP检测,结果均为阳性,而未染菌组均为阴性;PCR及LAMP检测霍乱弧菌的方法均具有灵敏度较高、特异性强等优点,且LAMP检测霍乱弧菌的方法灵敏度是PCR方法的100倍,更适合于养殖现场检测的推广使用.  相似文献   

大竹蛏(Solen grandis)翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因的分子克隆和表达特征分析     

韦秀梅  杨顶珑  杨建敏  杨嘉龙  徐洁  刘相全  张艳敏 《海洋与湖沼》2013,44(3):584-589

本研究克隆得到了一个大竹蛏(Solen grandis)翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因(SgTCTP)的cDNA全长,其序列全长为1055bp,5′和3′端的非编码区(UTR)分别为54和461bp,开放阅读框(ORF)540bp,编码179个氨基酸,理论等电点为4.50,预测分子量大小19.96kDa。通过荧光定量PCR法检测了SgTCTP在健康大竹蛏各组织中和病原相关分子模式(PAMPs)刺激后的表达规律,结果表明:SgTCTP在检测组织外套膜、鳃、性腺、血细胞、肌肉和肝胰腺中都有表达,其中在肝胰腺中的表达量最高。脂多糖(LPS)、肽聚糖(PGN)和葡聚糖(β-1,3-glucan)刺激都能诱导SgTCTP的表达量上调,SgTCTP的表达量分别在LPS和PGN刺激后6和3h达到最高,为空白对照的3.64和3.36倍;β-1,3-glucan刺激后SgTCTP的表达量上升幅度最大,在12h达到最高,为空白对照的11.76倍。SgTCTP可能作为急性时相蛋白参与大竹蛏的免疫应答。  相似文献   

白斑综合症病毒(WSSV)感染对虾的途径及滴度研究     

戴俊逸  李文婷  杨丰 《台湾海峡》2013,32(1):67-72

本研究利用荧光定量PCR技术,开展了白斑综合征病毒(WSSV)感染途径及染病最低病毒浓度的研究.用病毒分别感染对虾的口腔、鳃、背部甲壳和腹部软壳24 h后,利用qPCR测定血液中的病毒拷贝数,结果显示病毒主要通过口腔和鳃入侵宿主,并通过血液循环进行全身感染,但病毒不能穿过对虾的体表引起感染.此外,将对虾分别放在含不同病毒粒子浓度(101、102、103、104、105个/dm3)或含核衣壳的海水中培养,发现当海水中病毒粒子浓度低于102个/dm3时,对虾没有感染病毒,当浓度达到103个/dm3以上时能引起对虾感染.结果暗示103个/dm3是引起对虾感染的最低病毒粒子浓度,而核衣壳则不具有感染性.  相似文献   

暴发性流行病病原对中国对虾亲虾人工感染及对子代影响的PCR检测   总被引：12，自引：0，他引：12  

刘萍  孔杰  石拓  刘志鸿  李健  韩玲玲 《海洋与湖沼》1999,30(2):139-144

１９９７年４月在山东海阳市近海捕获１０尾中国对虾,采用患暴发性流行病的虾池中的病虾为毒种,进行人工感染试验采用两次了聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测方法,对感染亲虾的胃、腮、卵巢,以及卵和各期幼体进行跟踪检测,对经人工感染的１０尾亲虾组织的ＰＣＲ检测结果表明,６尾虾的胃样呈阳性,其中４尾为第１次检测出阳性;１尾虾的产呈阳性;２尾虾的卵巢样呈阳性,且其所产的孵子也呈阳性;每尾亲虾产卵所孵化出来的各期纪体,  相似文献