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1.
利用分光光度计比色法测定了温度、pH值和Hg^2＋等9种金属离子对体长24．2cm±0．7cm仿刺参（Apostichopus japonicus）消化道中蛋白酶活性的影响。结果表明，蛋白酶的最适温度为40℃，对热不稳定，最适pH为7．2。Hg^2＋，Mn^2＋，Ag^＋，Pb^2＋，Ba^2＋，Ca^2＋对蛋白酶的活性有抑制作用，抑制作用由强至弱依次为Hg^2＋〉Ag^＋〉Mn^2＋〉Pb^2＋〉Ca^2＋〉Ba^2＋，其中Hg^2＋和Ag^＋与对照差异极显著（P〈0．01），表现出极强的抑制作用；Cu^2＋，Zn^2＋，Mg^2＋则对酶活有一定的促进作用，其促进作用大小依次为Mg^2＋〉Zn^2＋〉Cu^2＋，Mg^2＋与对照差异显著（P〈0．05）。 相似文献
2.
利用凝胶过滤柱层析和阴离子交换柱层析技术，从牙鲆（Paralichthys olivaceus）胚胎孵化液中分离纯化出了大小约为34．8ku的牙鲆孵化酶。该酶卵膜裂解的最适反应温度为35℃，最适pH为7．0；对底物酪蛋白的米氏常数Km值为1．53mmol／L。该酶对丝氨酸蛋白酶和胰蛋白酶的特异性抑制剂非常敏感，而对其他蛋白酶抑制剂不敏感，表明该酶极可能是一种丝氨酸蛋白酶类型的胰蛋白酶。此外，该酶可浓度依赖性地被EDTA所抑制，被Cu^2＋所强烈抑制，被Ca^2＋和Mg^2＋所激活，对Zn^2＋则不敏感，表明该酶很可能是一种金属蛋白酶。 相似文献
3.
不同养殖期的凡纳滨对虾外壳膜NAGase基本性质比较 总被引：2，自引：0，他引：2
以不同生长期的凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）的外壳为材料，分离提取外壳膜N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（EC3．2．1．52，NAGase），测定分析不同生长期的外壳膜NAGase的酶比活力及其性质的变化．结果表明：不同生长期的酶活力、最适温度、催化反应的动力学参数（Km、vm）、活化能等均存在差异．不同生长期酶的最适pH均为5．5．不同生长期的对虾外壳膜NAGase对Cu^2＋、Zn^2＋和Hg^2＋的敏感性也不同．Cu^2＋对养殖8周对虾外壳膜NAGase的激活作用最为显著，可以使酶活力提高到400％．Zn^2＋对不同生长期的酶活力均有抑制作用，但对成体对虾酶抑制作用最为显著，可以使酶活力下降80％．Hg^2＋对各个生长期的酶活力影响效果也不一样，当浓度为0．1mmol／dm^3时，仅对养殖6、8、9周的对虾的酶有激活作用，当Hg“浓度为1．0mmol／dm^3时，五个生长期的虾皮NAGase活力均受到不同程度抑制． 相似文献
4.
采用MSM寡营养培养基从印度尼西亚Pantai cermin,Kalianda和Banyuwedang三个地区的热泉水样、泥样以及沉积物样品中分离获得细菌菌株,通过检测蛋白酶产生透明圈和福林酚蛋白酶活性测定相结合的方法,从中筛选出1株产嗜热蛋白酶的菌株PBI,该菌株经初步鉴定为短杆菌属(Brevibacillus),并对其酶学性质进行了研究。结果表明,菌株PBI产蛋白酶的最适酶活温度为60℃,最适pH值为8.0～9.0,具有较好的热稳定性和pH稳定性,60℃时酶的半衰期为30min,70℃条件下20min仍保持46.1%的酶活,该酶在pH值为5.0～9.0范围的缓冲液中酶活相对稳定。其产嗜热蛋白酶的酶活力最高可达到60.53U/mL,在100℃条件下仍能保留26.37%的相对酶活。Fe2+,Fe3+,Cu2+和Zn2+对嗜热蛋白酶活性具有明显的抑制作用。该嗜热蛋白酶对EDTA敏感,苯甲基磺酰氟(PMSF)、亮抑酶肽(Leupeptin)、苄眯(Benzamidine)和胃蛋白酶抑制剂(Pepstain A)对该嗜热蛋白酶都有一定的抑制作用,说明其酶活性受到丝氨酸、半胱氨酸残基的影响。结果表明,该菌株是1株具有进一步改造利用价值的产蛋白酶菌株。 相似文献
5.
采用双因子交互的方法研究了不同温度和pH值对南美白对虾淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活性的影响。结果表明，南美白对虾肝脏、肠道、胃的淀粉酶最适温度分别为30℃、35℃、30—35℃，最适pH均为6．2。肝脏、肠道、胃的蛋白酶最适温度分别为50—65℃、55—65℃、60℃，肝脏蛋白酶最适pH为8．5—9．0，肠道蛋白酶最适pH为7．5—8．5，胃蛋白酶最适pH为2．0和5．5—6．5。脂肪酶的活力很小，肝脏、肠道、胃的脂肪酶最适温度均为37℃ ，最适pH均为7．7。同时测得南美白对虾肠道、肝脏、胃组织内的pH分别为6．7—7．0、5．9—6．1、5．1—5．3。在三种消化酶各自最适的温度、pH值下，比较其活力大小，在肝脏、肠道、胃均为蛋白酶>淀粉酶>脂肪酶。 相似文献
6.
冷活性纤维素酶性质研究 总被引：1，自引：0，他引：1
对海洋嗜冷菌MB1所产冷活性纤维素酶的性质进行了研究。该酶最适反应温度为35℃，0℃时残余酶活约为20％，最适pH值为6．0，在pH5～7．5范围内酶活均较高。该酶对热敏感，50℃保温2h，残余酶活为15％；60℃时，酶完全失活。 相似文献
7.
本文研究了几种金属离子对锯缘青蟹（Scylla serrata）N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase）活力的影响．其结果表明：Li^＋、Na^＋和K^＋对酶活力没有明显影响，Mg^2＋、Ca^2＋和Ba^2＋对该酶均有激活作用，激活程度依次为Ca^2＋〉Ba^2＋〉Mg^2＋．Al^3＋、Fe^3＋、Cd^2＋、Pb^2＋和Hg^2＋对该酶具有一定的抑制作用，2．0μmol／dm^3的Hg^2＋可以使酶活力完全丧失．Co^2＋对酶的效应是先激活后抑制，Mn^2＋对酶仅有轻微的激活作用．Cd^2＋和Fe^2＋对锯缘青蟹NAGase的抑制作用都呈竞争性-反竞争性混合Ⅱ型效应，Cd^2＋的抑制常数Ki和KiS分别为23．9、5．0mmool／dm^3，Fe^3＋的抑制常数Ki和KiS分剐为395．5、135．6μmol／dm^3．Ki〉KIS说明酶一底物络合物（ES）与抑制剂的亲和力比游离酶（E）与抑制剂的亲和力大． 相似文献
8.
温度、pH对缢蛏(Sinonovacula constricta)消化酶活力的影响 总被引：8，自引：0，他引：8
本文研究了温度、pH对缢蛏(Sinonovacula constricta(Lamarck))三种主要消化酶(蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶)活力的影响。结果表明：当温度在5～75℃之间时，蛋白酶、纤维素酶和淀粉酶的最适温度分别为为55℃、45℃和65℃；在不同的pH范围内，蛋白酶的最适PH值为9．2，淀粉酶的最适PH值为6．3和7．7，纤维素酶的最适PH值为5．2。缢蛏的淀粉酶和蛋白酶活力较大，纤维素酶活力极微。 相似文献
9.
研究过氧化氢对锯缘青蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响及抑制动力学．其结果表明，过氧化氢对该酶有显著的抑制作用，随着过氧化氢浓度的增高，酶活力呈指数下降，测出可使酶活力下降50％的过氧化氢浓度（抑制半衰期，IC50）为115mmol／dm^3．低浓度过氧化氢对该酶的抑制过程显示为可逆效应．采用底物反应动力学方法研究过氧化氢对该酶的抑制作用动力学并建立动力学模型，测定游离酶（E）和酶．底物络合物（ES）的微观抑制速度常数k＋0和k＋0，并加以比较．实验结果（k＋0〉k＋0）表明底物对酶被过氧化氢的抑制作用有一定保护作用．过氧化氢可能是通过氧化酶活性中心功能基团而导致酶活性的丧失． 相似文献
10.
温度和pH值对南美白对虾(Penaeus vannmei)消化酶活性的影响 总被引：16，自引：3，他引：16
采用双因子交互的方法研究了不同温度和pH值对南美白对虾淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活性的影响。结果表明 ,南美白对虾肝脏、肠道、胃的淀粉酶最适温度分别为 30℃、35℃、30— 35℃ ,最适pH均为 6 2。肝脏、肠道、胃的蛋白酶最适温度分别为 5 0— 65℃、5 5— 65℃、60℃ ,肝脏蛋白酶最适pH为 8 5— 9 0 ,肠道蛋白酶最适pH为 7 5— 8 5 ,胃蛋白酶最适pH为2 0和 5 5— 6 5。脂肪酶的活力很小 ,肝脏、肠道、胃的脂肪酶最适温度均为 37℃ ,最适pH均为 7 7。同时测得南美白对虾肠道、肝脏、胃组织内的pH分别为 6 7— 7 0、5 9— 6 1、5 1—5 3。在三种消化酶各自最适的温度、pH值下 ,比较其活力大小 ,在肝脏、肠道、胃均为蛋白酶>淀粉酶 >脂肪酶。 相似文献
11.
海藻工具酶研究Ⅱ.褐藻酸酶的制备、性质及对裙带菜细胞的解离研究 总被引：8，自引：0，他引：8
褐藻酸降解菌埃氏交替单胞菌(Alteromonas espejiana)菌株Al01,通过发酵培养制备褐藻酸酶.该酶作用的最适pH为7.0,最适温度为40℃,最适底物浓度为1%～2%;在离子浓度为0.5mmol/dm3时,Mn2+对酶促反应稍有促进作用,Ca2+、Hg2+则有明显的抑制作用.该酶用于裙带菜单细胞和原生质体解离时,以酶液组成为褐藻酸酶1%、纤维素酶1%,45×10-3的NaC1为渗透剂,酶解温度25℃,pH7.0,酶解3-4h效果最好. 相似文献
12.
中华管鞭虾(Solenocera crassicornis)蛋白酶的纯化及其生化特性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
采用Tris-HCl缓冲液(50mmol/L,pH7.5)抽提、Q-sepharose F.F.阴离子交换层析、Sephacryl S-300凝胶过滤层析、SDS-PAGE等方法,进行中华管鞭虾虾头蛋白酶的分离纯化、酶学性质及其动力学特性的研究。结果表明,中华管鞭虾虾头蛋白酶粗提物经层析后,得到聚丙烯酰胺凝胶电泳纯的一酶组分。该蛋白酶的比活力从359.39U/mg增加到8277.83U/mg,提高了23.03倍,回收率达37.69%,SDS-PAGE显示该蛋白酶只含一条谱带,相对分子量为24.50kDa。以偶氮酪蛋白作为底物,该酶的米氏常数Km值为0.28mg/ml,最适温度为55℃,最适pH为7.5;蛋白酶在60℃以下比较稳定,放置1h后活性仍保持在60%以上,而在60℃以上时蛋白酶活性急剧下降,80℃放置1h后,酶活性只残留21.32%。10mmol/L Cu2 、Zn2 和EDTA对该蛋白酶有较强的抑制作用,抑制率分别约为97%、96%和55%,10mmol/LMg2 能显著促进蛋白酶活性,而10mmol/LFe2 、Ba2 、Ca2 对蛋白酶活性的影响不大。推测中华管鞭虾蛋白酶可能为一种金属蛋白酶。 相似文献
13.
褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum)是一种海藻酸降解菌.本实验采用PCR的方法,以褐球固氮菌基因组DNA为模板,克隆出约1.05 kb的海藻酸裂解酶基因algL的成熟蛋白编码序列,并将其插入巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC9K中,获得重组质粒pPIC9K-algL.重组质粒线性化后用聚乙二醇(PEG)法导入毕赤酵母菌株GS115中,获得高效分泌表达海藻酸裂解酶的毕赤酵母工程菌株.用甲醇诱导培养基进行摇瓶发酵,表达得到43 kDa的目的蛋白,酶活力可达1 400 U/cm3左右.经测定,该重组酶的最适反应pH为8.5,最适反应温度为40℃,并且在20~55℃,pH2.0~11.0具有较好的稳定性.另外,10 mmol/cm3的Cu2+,Fe2+,Co2+,Mn2+和Ca2+对酶有不同程度的抑制作用. 相似文献
14.
利用盐碱化湖泊和池塘水进行凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)淡化幼虾的生长试验,研究对虾生存和生长与水环境 K+,Ca2+,Mg2+,Na+/K+ 及 M/D(离子系数)的相关性,为内陆碱水水域养殖提供科学依据.结果表明,在碱度为 10.32～38.50 mmol/L,盐度 1.02～3.34,pH 8.5～9.5 的试验水环境下,幼虾存活率差异极显著(P< 0.01),体重特定生长率(SGRW)无显著性差异(P>0.05).存活率和 SGRW 值与水环境因子间的相关性存在因子间的互作效应,其简单相关系数都受到其他因子组合的负效应影响.存活率与 K+,Ca2+,Mg2+ 质量浓度和 Na+/K+ 及 M/D 的相关性不显著;SGRW 值与 Ca2+,Mg2+ 质量浓度和 Na+/K+ 及 M/D 显著相关,与 K+ 质量浓度的相关性很小(P>0.05).投施 KCl,CaCl2 及 MgCl2,可以改善内陆碱水水域 K+,Ca2+,Mg2+,Na+/K+ 及 M/D 的组成结构,有利于对虾生存与生长. 相似文献
15.
Enzymatic properties of UFE, a novel marine fibrinolytic enzyme 总被引：2，自引：0，他引：2
A novel potent protease, Urechis unicinctus fibrinolytic enzyme (UFE), was firstly discovered. The enzymatic properties of UFE were further investigated. As a low molecular mass protein, UFE appeared to be very stable to heat and pH. When temperature was below 50 ℃, the remnant enzyme activity remained almost unchanged, but when temperature was raised to 60 ℃, the remnant enzyme activity began to decrease rapidly. UFE was quite stable in the range of pH value from 3 to 12, especially in slightly alkaline pH value. Mn2 , Cu2 and Fe2 ions were activators of UFE, while Fe3 and Ag ions were inhibitors of UFE. Fe2 ion along with Fe3 ion might regulate UFE activity in vivo. The optimum pH and temperature of UFE were about 8 and 50 ℃, respectively. Other characteristics of this enzyme were also studied. Systematic research results are significant when UFE is applied for medical and industrial purposes. 相似文献
16.
初筛表明,一株分离自北极加拿大海盆海冰心芯样品的海单胞菌(Marinomonas sp.BSi20584)具有较高的β-D-半乳糖苷酶活性,为了研究清楚其酶学性质,将经hiTAIL-PCR扩增得到的β-D-半乳糖苷酶基因(galt)与pET-28a(+)原核表达载体结合,转入大肠杆菌BL21(DE3)。经IPTG诱导后对重组β-D-半乳糖苷酶(GALT)的表达条件进行了优化,采用金属螯合亲和层析技术制备纯酶,并对重组GALT的酶学性质进行了研究。结果显示,重组酶的最适诱导温度为20℃,在IPTG浓度为0.07mmol/L时诱导22h后,酶活和产酶量达到最大值。GALT单体分子量约为6.6×104 g/mol,天然酶为同源三聚体。GALT最适作用温度为35℃,其热稳定性较好,在60℃处理5h后,仍可保持50%以上的相对活性。GALT的最适作用pH为9.0,在pH为6.0~11.0范围内比较稳定。GALT的最适NaCl浓度为0.5mol/L,对盐度具有较高的耐受性。Mg2+、K+、DTT和EDTA对酶活不具有显著影响,而Mn2+、Fe2+对酶活有促进作用,Zn2+和L-谷胱甘肽对酶活有抑制作用。GALT对Galβ1-4GlcNAc具有水解作用,而对Galβ1-3GalNAc和Galβ1-3GlcNAc糖苷键型没有水解能力。本研究实现了海单胞菌属菌株的β-D-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌系统中的高效表达,并系统研究了重组酶的酶学特性,为后续开展该酶的代谢适应性和潜在应用研究提供详细的酶学数据基础。 相似文献
17.
对具有高淀粉酶活性的南极菌Pseudoalteromonas sp. A211-5的全基因组数据进行了分析和筛选,筛选获得α-淀粉酶疑似序列amy3809,并采用基因工程手段对该基因的功能和性质进行验证和分析。首先,以淀粉酶Amy3809的完整开放阅读框(ORF)为模板设计特异引物,克隆获得amy3809的全序列并对其进行重组表达,获得的重组蛋白采用镍柱进行分离纯化;DNS-还原糖法测定重组酶的酶学性质;薄层层析(TLC)技术对Amy3809的酶解产物进行分析。实验结果:1)克隆获得的amy3809成功地连接到pET-30a载体,并在工程菌E.coli BL21(DE3)中实现了高效表达,纯化的重组酶Amy3809分子量为67 kDa;2)重组酶Amy3809在10~40℃的范围内仍能保持85%以上的酶活,但随着温度的升高酶活迅速降低,70℃时几乎失活,表明该酶具有良好的低温耐受特性及热敏感性;3)最适pH为7.0,在pH 5.0~10.0的范围内仍能保持50%以上的活性;4)金属离子Na+,K+和Ca2+均能提高Amy3809的活性,而Cu2+,Fe2+,Mg2+和EDTA则能显著降低Amy3809的活性;5)Amy3809的酶解产物主要为麦芽四糖、麦芽三糖、麦芽糖和葡萄糖。由此可知,南极菌产的α-淀粉酶Amy3809,具有良好的低温耐受特性,热敏感性和较广的pH耐受范围,并能够有效地将淀粉降解为低聚糖和葡萄糖,因而具有潜在的工业应用前景。 相似文献
18.
A strain of psychrophilic bacterium, 2-5-10-1, which produces low-temperature lipase, is isolated from the deep sea of Prydz Bay in Southern Ocean. The highest lipase secretion of this strain is observed at 5 ℃ and this temperature is also for optimal growth. Tween 80 and olive oil enhance secretion of lipase. The optimal temperature and pH for lipase activity are 35 ℃ and 7.5 ℃ respectively. At 0℃, the lipase still has 37% relative enzyme activity. The lipase shows high thermolability, more than 50% activity lost after incubation at 60 ℃ for 15 min. EDTA has no effect on lipase activity, indicating the lipase activity is independent of divalent cation. In contrast, the lipase activity is inhibited drastically by Cu2 and Zn2 . 相似文献
19.
嗜热栖热菌(Thermus thermophilus)wl的超氧化物歧化酶基因在Escherichia coli BL21(DE3)中进行表达,采用Ni-NTA agarose亲和层析获得重组超氧化物歧化酶,比活力达565 U/mg.重组酶的相对分子质量为110.9 kDa,亚基相对分子质量为28.3 kDa,该酶为同聚四聚体蛋白.重组酶对氯仿-乙醇和SDS敏感,对H2O2不敏感,并且它的紫外最大吸收波长位于279 nm,判断其属于锰超氧化物歧化酶类型.1.0 mmol/dm3Mn2+对重组酶有激活作用,同浓度的其他金属离子Mg2+、Ca2+、Ba2+、Co2+、Cu2+、Zn2+和Fe2+对重组酶活力都有抑制作用,其中以Co2+的作用最强,抑制了约64%的酶活性.重组酶在70℃下处理1 h,保持原有活力的60%,即使在90℃下处理1 h,仍保持原有活力的35%.在pH值为4.0～11.0的缓冲液中25℃下处理1 h,保持65%以上的原始活力.由此可见,重组锰超氧化物歧化酶具有高的热稳定性和宽pH稳定性,在工业上具有巨大的应用潜力. 相似文献